CY3-siNC,CY3标记非编码小干扰RNA的制备方法
Cy3-siNC是一种非编码(Negative Control,负对照)小干扰RNA,其序列不靶向任何已知基因,且带有荧光染料Cy3,用作RNA干扰实验中的对照组,确保实验结果的特异性和准确性。
制备方法详述:
非编码序列设计
设计不与任何细胞内mRNA匹配的随机序列,保证不影响任何基因表达。序列长度通常为19-21核苷酸,结构稳定。
合成与纯化
利用固相化学合成方法合成siRNA双链,合成流程包括核苷酸逐步加成、脱保护及切割。
纯化步骤采用高效液相色谱(HPLC)或凝胶电泳去除杂质,保证产品纯度。
Cy3标记修饰
在合成时,5’端或3’端引入带有氨基修饰的核苷酸,为Cy3-NHS酯的标记反应提供位点。
Cy3-NHS酯在适宜缓冲条件(pH 8.0-8.5)下与氨基发生酰胺键形成,标记反应一般进行1-3小时,避光以防荧光淬灭。
双链退火
标记单链siRNA与对应互补链按1:1比例混合,缓慢退火形成稳定双链结构,模拟siRNA活性形式。
纯化与鉴定
反应完成后通过透析、凝胶过滤或HPLC纯化,去除未反应的Cy3和游离单链。
采用紫外-可见光谱、荧光光谱和质谱确认标记的成功与分子完整性。
储存条件
纯化后产品冻干或储存在-20℃避光环境,确保标记荧光稳定和分子活性。
质量控制
进行功能验证,确保siNC不干扰靶基因表达,荧光强度适合检测。
产品名称:CY3-siNC
纯度:95%+
性状:固体或液体
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
厂家:齐岳生物
关于我们
齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务,如活性酯(NHS酯)、马来酰亚胺(MAL)、叠氮(N₃)、炔基(alkyne)等,便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合,实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外,齐岳生物还提供定制染料标记服务,包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物,满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。
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仅供科研,不能用于人体实验AXC.2025.06.23