CY5标记的SE三乙胺盐，CY5-SE triethylamine salt的纯化与表征

Cy5-SE三乙胺盐是以花菁染料Cy5为母核、在侧链羧基处引入琥珀酰亚胺活化酯（SE）的胺选择性标记试剂，阴离子染料部分与三乙胺形成有机胺盐，提高固体形态下的流动性与在无水性溶剂中的溶解性。该分子保留Cy5的长波吸收与近红区发射特征，适配常见激发线（633–647 nm），发射位于660–670 nm。SE基团对伯、仲胺具有较高反应选择性，在pH 8.0–8.8缓冲条件下与胺发生亲核取代生成稳定的酰胺键；水相中会随时间水解为非活化的羧酸，因此建议以无水DMSO或DMF制备浓缩母液，临用前滴加至目标体系。该试剂常用于蛋白质、肽、多糖-胺化衍生物、纳米材料表面的胺位点标记；为减少非特异反应，应避免含游离胺的缓冲组分（如Tris、甘氨酸），常用碳酸氢盐、硼酸盐或PBS（配以少量有机相）作为反应介质。典型摩尔投料比为染料：胺位点=3–10:1，室温或低温避光反应0.5–2 h。固体需干燥、避光、低温保存（-20 °C，干燥剂），溶液状态建议一次性分装，减少冻融；三乙胺盐作对离子不影响成键，但在水相纯化时可被交换或去除。

纯化与表征

反应后纯化：

蛋白/大分子偶联物：优先采用凝胶过滤或脱盐柱（如G-25/G-50或10 kDa超滤）去除游离染料与小分子副产物；也可用尺寸排阻层析实现缓冲更换。若需更高纯度，可使用离子交换或弱疏水色谱做进一步抛光。

小分子偶联物：推荐反相制备HPLC（C18，水/乙腈梯度，挥发性酸作离子对，如0.1%甲酸）；游离Cy5与目标产物保留时间存在明显差异，便于分离。必要时进行对离子交换以得到所需盐型。

固体染料原料的纯化与干燥：合成后通过反相或正相柱层析去除未反应中间体与NHS副产物，减压除溶剂后在真空下于室温干燥，装入避光容器。目标纯度通常以HPLC（650 nm监测）达≥95%为合格标准。

结构与性质表征：

• UV-Vis：在甲醇或PBS中测定吸收光谱，Cy5主吸收峰约646–650 nm，肩峰与短波带用于判定纯度与聚集行为。

• 荧光：发射峰约662–670 nm，量子产率受溶剂与环境影响；蛋白偶联后可观察到微小位移或强度变化，用于评估微环境效应。

• 质谱：原料染料显示含SE的分子离子峰；偶联产物增加的质量等于“Cy5染料骨架去NHS后的质量”与底物胺形成酰胺后的增量。对大分子可用LC-MS（脱盐）或高分辨MS表征小分子偶联物。

• HPLC/UPLC：多波长检测（260/280/650 nm），目标峰单一且保留时间稳定；峰面积归一化用于计算纯度与游离染料残留。

• IR：SE羰基带与酰胺I/II带用于区分活化酯与成键后产物；活化酯水解将出现羧酸特征吸收。

• NMR（适用于小分子）：在DMSO-d6或CD3OD中观察花菁骨架与丁二酰亚胺特征信号；偶联后NHS相关信号消失。

• 蛋白偶联DOL（标记度）：按DOL = (A650/εCy5)/(A280/ε蛋白 − CF×A650/ε蛋白)估算，CF为Cy5对A280的校正系数（经验值约0.05–0.08，按供应商数据修正）。

• 体系稳定性：监测pH 8.3下SE水解动力学，优化加料顺序与反应时长；通过随时间的HPLC与吸收变化评估稳定性。

产品名称：CY5标记的SE三乙胺盐

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

推荐产品：

CY3标记的转铁蛋白 CY3-TF

CY3标记的转铁蛋白 CY3-Transferrin

CY3标记的转铁蛋白，TF， Cy3-Transferrin，TF，

CY3标记的缀合物 CY3-conjugate

CY3标记的紫杉醇 Cy3-PTX

CY3标记的组蛋白 CY3-Histone

CY3标记多巴胺 CY3-Dopamine

仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.06.23