Sulfo-Cy3.5 NHS Ester，磺酸基-Cy3.5-乙基琥珀酰亚胺酯的合成过程

Sulfo-Cy3.5 NHS Ester，也称磺酸基-Cy3.5-乙基琥珀酰亚胺酯或CY3.5-NHS-Sulfo，是一种基于CY3.5荧光染料的水溶性活性酯衍生物，广泛应用于生物分子标记和化学研究。CY3.5是一种橙红至红色荧光染料，激发波长约为550纳米，发射波长约为570纳米，具有高荧光亮度、良好的光稳定性和较低的自发荧光背景。通过在染料分子上引入NHS活性酯和磺酸盐（Sulfo）修饰，Sulfo-Cy3.5 NHS Ester不仅保留了荧光性能，还提高了水溶性和生物兼容性，适合在水性缓冲液中与蛋白质、抗体、肽链等氨基功能团进行共价偶联。

Sulfo-Cy3.5 NHS Ester的合成过程主要基于羧基活化策略。首先，CY3.5母体染料的羧基在碳二亚胺类偶联剂（如EDC, 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐）作用下活化，生成O-酰基异氰脲中间体。随后，该中间体与N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）发生反应，形成CY3.5-NHS活性酯。磺酸盐修饰通常在染料侧链或羧基附近引入，通过磺酸化反应增强染料的水溶性和负电荷特性，从而减少在水溶液中非特异性吸附和疏水性聚集。整个合成过程通常在弱酸性至中性缓冲液中进行，温和的反应条件可避免染料分子降解或荧光猝灭。

在合成研究中，反应条件对产物质量和荧光性能影响显著。pH值需控制在5.5至7.5，以保证羧基活化效率和NHS偶联反应效率；温度一般控制在室温或略低，以防止染料光降解和活性酯水解。溶剂体系通常采用水-有机混合溶剂，如DMSO与缓冲液混合，以保证反应物充分溶解。为避免光敏性降解，整个过程需在避光条件下进行。活性酯的水解速率较快，因此Sulfo-Cy3.5 NHS Ester在合成完成后通常采用冻干或低温保存，避免水分引起活性降低。

纯化是Sulfo-Cy3.5 NHS Ester合成过程的重要环节。常用反相高效液相色谱（HPLC）进行纯化，通过C18柱在水-乙腈梯度体系中分离目标产物与未反应的染料、EDC副产物及其他杂质。磺酸盐修饰的水溶性有助于在HPLC柱中获得良好峰形和分离效率。收集目标峰后，通过旋转蒸发或冻干除去溶剂，得到高纯度的Sulfo-Cy3.5 NHS Ester。

表征方面，通过紫外-可见光谱（UV-Vis）、荧光光谱和质谱（MS）确认产物的光学性质和分子量。UV-Vis光谱显示染料的吸收峰与CY3.5母体一致，荧光光谱确认发射波长和强度，质谱可验证活性酯和磺酸盐修饰的结构完整性。必要时，核磁共振（NMR）可进一步确认侧链和磺酸修饰位置。

Sulfo-Cy3.5 NHS Ester合成过程的研究不仅关注产物产率和纯度，还强调活性酯稳定性、光学性能保持及水溶性调控。通过优化羧基活化条件、磺酸盐引入策略和纯化流程，可以得到高活性、高纯度的水溶性试剂。该化学工具可用于蛋白质、抗体、肽链及纳米材料的共价标记，实现近红外荧光示踪、生物分子定位和多功能材料构建。

总之，Sulfo-Cy3.5 NHS Ester通过羧基活化、NHS偶联和磺酸盐修饰形成水溶性、光学性能稳定的活性荧光酯。其合成过程涉及温和反应条件、溶剂体系控制、纯化及多手段表征，保证了染料的荧光性能和化学活性，为生物标记、化学探针和功能化材料研究提供了可靠工具。

产品名称：Sulfo-Cy3.5 NHS Ester

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

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齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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