Alexa Fluor 680标记链霉亲和素，Alexa Fluor 680 Streptavidin，AF680-SA，反应条件

Alexa Fluor 680 标记链霉亲和素（Alexa Fluor 680 Streptavidin, AF680-SA）是一种由链霉亲和素（Streptavidin, SA）与 Alexa Fluor 680（AF680）荧光染料偶联形成的功能性标记蛋白。链霉亲和素是一种四聚体蛋白，具有极高的生物素结合亲和力（Kd ≈ 10^-15 M），能够特异性结合生物素化分子。AF680 是一种近红外荧光染料，激发波长约为 679 纳米，发射波长约为 702 纳米，光稳定性好，荧光亮度高，并且生物样品自发荧光干扰低。通过将 AF680 与链霉亲和素偶联，可以形成兼具生物素结合能力和可检测荧光信号的标记分子，用于免疫标记、成像和分子检测等实验。

AF680-SA 的偶联反应主要依赖于染料的活性官能团与链霉亲和素赖氨酸残基的氨基之间的共价反应。通常使用的 AF680 荧光染料以 N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯形式提供活性官能团。NHS 酯可以与蛋白质中的伯胺或仲胺发生亲核加成反应，生成稳定的酰胺键，从而将荧光染料牢固地偶联到链霉亲和素上。这种反应是一种温和的化学反应，能够在不破坏蛋白空间构象和生物活性的条件下完成偶联。

反应条件对 AF680-SA 偶联效率和产物质量有重要影响。一般来说，反应在 pH 7.5–8.5 的缓冲体系中进行，如碳酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液。在这一范围内，链霉亲和素赖氨酸残基的氨基呈非质子化状态，具有较高的亲核性，同时 NHS 酯水解速率较低，从而提高偶联效率。反应温度通常控制在 4–25 摄氏度，既保证反应动力学，又避免蛋白质热变性。整个反应过程需避光操作，以防荧光染料光漂白和活性损失。

偶联过程中，染料与蛋白的摩尔比是控制荧光强度和蛋白功能的关键因素。过量的 AF680 会导致蛋白过度修饰，从而可能改变链霉亲和素的空间结构和生物素结合能力；而染料不足则降低荧光信号强度。因此，通常通过优化染料与蛋白的摩尔比，保持荧光亮度与生物活性之间的平衡。

偶联反应完成后，通常需要对产物进行纯化，以去除未反应的染料及低分子杂质。常用的纯化方法包括透析、凝胶过滤或层析技术。纯化后的 AF680-SA 水溶性良好，荧光分布均匀，并且保持高亲和力结合生物素化分子。纯化后产物可在缓冲体系中稳定储存，便于后续实验使用。

在实验应用中，AF680-SA 由于其近红外荧光特性，非常适合在组织切片、体内成像及多色荧光实验中使用。其激发和发射波长位于近红外区域，可减少样品自发荧光干扰，提高信噪比。通过结合生物素化抗体或探针，AF680-SA 可用于免疫组化、免疫荧光、流式细胞术、分子捕获和靶向追踪等实验。其高亲和力结合和荧光可视化功能使实验结果更可靠且易于定量分析。

产品名称：Alexa Fluor 680 标记链霉亲和素

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.09