CY5标记的阿法替尼，Cy5-Afatinib的合成步骤概述

Cy5-Afatinib为在阿法替尼分子上接入近红区花菁染料Cy5的共价偶联物，目标是通过可控的间隔臂将染料与小分子骨架分离，以减小对母体分子结合域与电子结构的干扰，同时保持Cy5在640–650 nm吸收与660–670 nm发射的光谱特征。阿法替尼骨架含有活性烯酰胺（Michael受体）与芳胺/醚链取代位点，直接暴露于强碱或亲核硫/胺时易发生加成或副反应，因此标记策略以“先引入可控连接基 → 再与Cy5反应”为主。常见路径包括：在不触发烯酰胺的温和条件下，利用碳酸活化剂将分子上的可修饰羟基或二级胺转化为含伯胺或叠氮/炔基的功能化衍生物，再与Cy5-NHS、Cy5-N3/DBCO、或Cy5-alkyne进行后续偶联。为获得均一度与可表征性，一般优选单位点改造与亲水PEG间隔臂（PEG2–PEG6），以提升水溶性与色素-药物比例（D/P）控制度。

合成步骤概述

步骤1：连接臂引入。以阿法替尼可修饰位点（例如侧链羟基或二级胺）为起点，在干燥DMF中加入N,N’-二琥珀酰基碳酸酯（DSC）或对硝基苯基氯甲酸酯（pNPC）进行温和活化（0–5 °C，TEA或DIPEA作缚酸剂），随后滴加带伯胺的HO-(PEG)n-NH2或带叠氮/炔基的HO-(PEG)n-X，生成碳酸酯/氨基甲酸酯型阿法替尼-连接臂中间体。控制等当量与时间，避免过度活化导致烯酰胺位点副反应。

步骤2：与Cy5偶联。

• 路径A（胺-活化酯）：若中间体末端为伯胺，则在无水DMSO/DMF中与Cy5-NHS（或Cy5-SE三乙胺盐）反应，pH等效8.0–8.5（有机相中以DIPEA计量），室温避光0.5–2 h，生成稳定酰胺键。

• 路径B（生物正交点击）：若中间体带叠氮，则与Cy5-DBCO进行应力促进的SPAAC；若带炔基，则与Cy5-N3在CuAAC条件下反应（CuSO4/BTAA或THPTA配体，剂少量，水/有机混合溶剂）。

步骤3：纯化与成盐。小分子产物采用制备型RP-HPLC（C18，水/乙腈+0.1%挥发性酸）分离，收集主峰后冻干；必要时进行对离子交换以改善溶解性与稳定性。

步骤4：表征。UV-Vis/荧光确认光谱；HR-MS确认分子量；1H/13C NMR验证连接臂与染料特征信号；HPLC纯度≥95%。

注意：全程避光、低水活度操作，避免强核试剂接触烯酰胺；连接臂长度与位点需通过小试优化，以平衡光学性质、溶解性与结构完整性。

产品名称：CY5标记的阿法替尼，Cy5-Afatinib

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.06.23